果實中有機酸的測定-HPLC法

    果實中的有機酸有草酸、乙酸、蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸、乳酸等。乳癰常規(guī)的酸堿滴定法，雖然可測出總算量，但對各成分酸的含量則無法確定，若采用液相色譜法（HPLC）則可解決此難題。

     液相蘇測有機酸是利用有機酸在化學合C18固定相與2%NH4H2PO4的流動相分配系數(shù)之間的差異而進行分離后，再經(jīng)紫外檢測器或示差吸光檢測器而檢出，定性可根據(jù)色譜曲線的保留時間，定量可根據(jù)色譜峰面積或峰高，利用外標法計算而得。

試劑和儀器 夜宵液相色譜儀，告訴離心機，0.45nm唯恐過濾膜，10ml進樣器。NH4H2PO4496%乙醇，0.01mol/NaOH及200ppm標準有機酸.

試驗步驟

1、樣品的處理 5-10g樣品用80%乙醇25ml于75℃水浴中提取15min，冷后離心，收集煽情也，沉淀10ml80%乙醇洗兩次，江上清液收集在一起，zui后用80%乙醇定容至50ml取5ml蒸發(fā)至干（在75℃下），殘渣用5ml流動相溶解。共色譜測定用。

2、標準溶液的配制  取200ppm的原液0.5、1、2、3、4ml，用流動相稀釋至5ml混勻后共色譜測定用。

3、色譜測定

固定相：化學鍵合C18

流動相：2.5%NH4H2PO6(PH=2.8)

流速：1ml/min

進樣量10ul

檢測器：紫外檢測器（214nm），0.1AUFS

以峰高或峰面積做標準曲線，從標準曲線上查找出有機酸濃度求算出有機酸含量。